神經干細胞培養基自然篩選法

    神經系統疾病的基因導入治療如前所述，癌基因轉染干細胞形成的永生細胞系不僅可以成功地整合于植入部位，而且可以穩定地表達轉染的外源性基因，這就為中樞神經系統的基因治療提供了一個性能*的載體。利用溫度敏感性水生神經干細胞系建立的分泌NGF的細胞系，將其移入到被*切斷穹隆的鼠紋狀體及中隔后，移植細胞不但能良好地存活于腦組織中而且在體內還能持續分泌 NGF，并使90%的膽堿能神經元得到修復。

    神經干細胞是一種終身具有自我更新能力及廣泛分化潛能的細胞，它處于分化的非終末狀態，可通過對稱或不對稱分裂生成新的干細胞和分化潛能逐漸變小的子細胞，zui終產生中樞神經系統的三種主要細胞，既神經元細胞、星形膠質細胞和少突膠質細胞。神經干細胞存在于胚胎神經系統及成年腦的某些特定部位，其特征性的生物學標志為神經巢蛋白。胚胎神經干細胞的分裂增殖分化是神經系統發生的基礎，成年神經系統中干細胞的功能還不十分明確，一般認為它們（尤其是位于海馬區的干細胞）很可能與認知功能密切相關，是神經功能可塑性的基礎。具體的說就是在某些外界環境影響下，干細胞在局部生成的新神經元可以參加記憶的形成和整合，即大腦控制行為，行為又可以反過來影響大腦的結構。

    神經干細胞培養基自然篩選法是迄今應用，也是zui簡單和容易操作且行之有效的方法。其原理是利用特殊的培養基使成熟的神經細胞無法較長時間地成活，而分離篩選出能夠在該培養條件下存活并增殖的神經干細胞群體。首先將含神經干細胞的神經組織通過機械或酶解分散等方法制備成單細胞，然后培養于含有特殊營養添加劑和促增殖因子的不含血清的培養液中。非神經干細胞在這種培養系統中由于營養缺陷無法較長時間地存活，而神經干細胞則適應該培養體系并在促增殖因子作用下生長增殖。因此，經過培養一段時間之后，就可獲得通過這種自然篩選而增殖形成的呈神經球狀生長的神經干細胞群體。這種利用特殊培養基自然篩選神經干細胞方法的優點是：簡便易行，不需要特殊的儀器設備等條件，分離效率高，神經干細胞損傷小易于成活。

    神經干細胞體外培養另外很重要的一點就是如何盡量讓其少分化或不分化，除了神經干細胞本身的特性決定了一部分不對稱分裂的細胞必將發生自主分化外，培養條件對神經干細胞的分化與否影響很大，比如在培養中發現，將神經干細胞球培養于塑料器皿，其黏附于器皿表面并發生分化的可能要比培養于玻璃器皿的高很多。另外，某些底物如多聚賴氨酸或多聚尿氨酸、作為細胞外基質的的層黏臉蛋白、膠原等都能在無特殊誘導劑存在的情況下，促進神經干細胞的貼壁而分化。神經干細胞在體外分化的形態表現為由圓形變成帶有明顯突起、形態各異的神經細胞，懸浮的神經球出現貼壁呈圓盤狀，形態各異的細胞向周圍呈放射狀長出并遷移，甚至全部細胞均分化平鋪于器皿上生長。