造血干細(xì)胞培養(yǎng)基配制

    人造血干細(xì)胞作為成體干細(xì)胞的重要組成，尤其在胚胎干細(xì)胞定向誘導(dǎo)分化為造血干細(xì)胞的機(jī)理、CD34和CD45等表面標(biāo)志分子成功篩選、培養(yǎng)條件的優(yōu)化探索中取得了突破性進(jìn)展，這為治療惡性血液疾病、根本緩解血細(xì)胞來源緊張等臨床應(yīng)用提供了可能。本文就人類胚胎干細(xì)胞向造血干細(xì)胞方向分化的研究進(jìn)展作如下綜述，以期為致力于該研究領(lǐng)域工作的科研人員提供一些有益的參考。
    人體大部分骨頭的中央部門有骨腔,骨腔內(nèi)所含的物質(zhì)即骨髓.骨髓中有一種能起著造血功能的細(xì)胞就叫造血干細(xì)胞.人血中的紅細(xì)胞,血小板,淋巴細(xì)胞,粒細(xì)胞等,都是由它經(jīng)過多次分化發(fā)育而成的.
    造血干細(xì)胞( hematopoietic stem cell，HSC) 具有高度的自我更新和多向分化潛能，是組織特異性干細(xì)胞研究中zui為活躍和成熟的研究方向，也是組織特異性干細(xì)胞轉(zhuǎn)分化研究的發(fā)源地和核心，已經(jīng)成為目前研究zui為深入的成體干細(xì)胞，在世界范圍內(nèi)得到了廣泛應(yīng)用。
    造血干細(xì)胞培養(yǎng)基配制
    一、配制用水
    培養(yǎng)基的大部分是水，所以水的質(zhì)量直接影響培養(yǎng)基的質(zhì)量。按Waymouth標(biāo)準(zhǔn)，水的電阻應(yīng)為200萬歐姆，一般實(shí)驗(yàn)室里以玻璃蒸餾器制備的雙蒸水或三蒸水可以符合使用條件。
    二、培養(yǎng)基
    培養(yǎng)基有天然、人工兩種。一般實(shí)驗(yàn)室使用的是RPMI-1640粉末培養(yǎng)基，以雙蒸或三蒸水配制。NaHCO3（或HCl）調(diào)pH至7.2-7.4，若pH值超過7.6或遠(yuǎn)低于6.8，則大多數(shù)細(xì)胞不能生長。RPMI-1640不耐高壓滅菌，使用前需經(jīng)滅菌0.22μm孔徑濾膜濾過處理。
    三、血清
    培養(yǎng)中常使用小牛血清（或胎牛血清）。血清亦不能高壓滅菌，無菌的小牛血清需在56℃水浴30分鐘滅活補(bǔ)體，置4℃冰箱存放待用。配制時(shí)含量視培養(yǎng)細(xì)胞種類、時(shí)間而定，一般用10—15%。由于血清成分復(fù)雜、條件不易控制，可選用無血清培養(yǎng)基。
    四、抗菌素
    為防止培養(yǎng)時(shí)期細(xì)菌的污染，可在培養(yǎng)基中添加適當(dāng)抗菌素，一般用量與組織細(xì)胞培養(yǎng)相同：卡那霉素100單位/毫升，或雙抗--青霉素100單位/毫升，鏈霉素100微克/毫升。
    五、植物血凝素（PHA）
    非增殖期的細(xì)胞不能制備染色體，如人外周血淋巴細(xì)胞，但在離體培養(yǎng)過程中，在PHA的作用下，可被刺激轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞而進(jìn)入有絲分裂。
    經(jīng)實(shí)驗(yàn)測(cè)定其分裂高峰分別于培養(yǎng)后44-48小時(shí)和68-72小時(shí)。
    PHA有粘多糖，蛋白質(zhì)兩種重要成分。粘多糖促使有絲分裂，蛋白質(zhì)起凝集作用。PHA激活的細(xì)胞數(shù)隨其濃度而增加，直至全部免疫活性細(xì)胞均被激活為止，但PHA濃度過高會(huì)引起凝集，一般采用4%濃度為好。