血清在細胞培養(yǎng)中常見問題

市場上的胎牛血清種類繁多，魚龍混雜，使人難以分辨真?zhèn)渭捌焚|(zhì)。好不容易在眾多*中挑選出誠心如意的產(chǎn)品后，那我們就可以安心使用了嘛？

不不不，下面小編給大家匯總小伙伴經(jīng)常咨詢的一些問題。

? 正常情況下，融化后血清的外觀顏色應(yīng)該是？
血清為動物來源，成分復(fù)雜，不同批次間會存在一些外觀上的差別。一般情況下，它們的顏色可能是金黃色、紅色、琥珀棕色或者是介于三者之間。

? 血清應(yīng)如何保存？
未拆封的血清應(yīng)存放于-15至-20℃，避免反復(fù)凍融。拆封后的血清應(yīng)無菌分裝成一次的用量并存放于-15至-20℃，在產(chǎn)品質(zhì)量證書標識的效期內(nèi)均可使用。2-8℃溶解后建議盡快使用。

? 血清的有效期是多久？
大部分康寧血清效期是5年，針對每個批次，請通過質(zhì)檢文件確定具體效期日期。


? 血清應(yīng)如何融解？
從冰箱中取出血清，放于2-8℃融化，融化過程中不時旋轉(zhuǎn)（swirling mix）混勻。充分融解后分裝或平衡到室溫后使用

? 為什么有時血清中出現(xiàn)絮狀沉淀？是否需要去除？如何去除？
多種原因可能導(dǎo)致絮狀沉淀的形成，原因之一是融化過程中，脂蛋白聚集所致。該現(xiàn)象一般不會影響產(chǎn)品質(zhì)量。可以400g離心5分鐘，取上清，然后過濾。根據(jù)需要選擇合適的濾膜孔徑，一般的是0.22um PES材質(zhì)的濾膜。為避免濾膜阻塞，建議離心后取上清加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾而不是直接過濾血清。

? 為什么存放于冰箱中的血清會出現(xiàn)沉淀？如何避免該現(xiàn)象？
在2-8°C條件下存放，血清中的多種蛋白或脂蛋白會形成肉眼可見的沉淀，如血纖蛋白（fibrin），單體時處于溶解狀態(tài)，在凍融過程中會發(fā)生聚集，形成肉眼可見的沉淀。但該現(xiàn)象一般不會影響血清的性能。可以400g離心5分鐘，取上清，然后過濾。根據(jù)需要選擇合適的濾膜孔徑，一般的是0.22um PES材質(zhì)的濾膜。為避免濾膜阻塞，建議離心后取上清加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾而不是直接過濾血清。為盡量避免出現(xiàn)上述現(xiàn)象，建議血清分裝成一次性用量存于-15°至-20℃冰箱，避免反復(fù)凍融和融化后的血清在2-8°C條件下長時間放置。

? 血清是否需要做滅活處理？
這取決于您的應(yīng)用。
滅活過程中，會導(dǎo)致血清中某些成分被破壞，如氨基酸，維生素，生長因子等。所以只有在您的實驗對血清有特殊要求時，才會考慮對血清進行滅活處理。如您的實驗對血清中的某種組分敏感，需要去除該組分。見的情況是需要去除血清中的補體蛋白，因為補體在機體中參與細胞殺傷，巨噬細胞和淋巴細胞活化，肥大細胞和血小板組胺釋放，平滑肌收縮等過程，所以一般在免疫學(xué)相關(guān)研究中及肌細胞和干細胞的培養(yǎng)過程中需要對血清進行滅活處理。

? 如何進行血清滅活處理？
血清請先按上述“血清應(yīng)如何融解”中的操作步驟融化和混勻，熱滅活時請將血清置于56℃水浴30分鐘。為盡量減少熱滅活對血清品質(zhì)的影響，一次滅活的血清體積不宜過大。準備同樣的容器裝相等體積的水（與血清相同溫度），滅活時將裝有血清和水的容器同時放入56℃水浴, 在裝水的容器中放置溫度計，加熱過程中不時輕輕旋轉(zhuǎn)混勻血清，當(dāng)溫度計顯示達到56℃左右，開始計時。56 ℃水浴后，建議馬上轉(zhuǎn)移到冰上降溫。

? 為什么需要對血清進行g(shù)amma射線輻照？
gamma 射線輻照的目的是滅活血清中的病毒，一般情況下，25-40kGy和30-45kGy是常用的輻射劑量。


? 什么情況下需要無Ca2+/Mg2+離子的PBS？
取決于您的研究應(yīng)用。除了一些Ca2+/Mg2+會影響實驗結(jié)果的實驗以外，一般在胰酶消化前，建議用無Ca2+/Mg2+離子的PBS清洗細胞，因為Ca2+/Mg2+會抑制胰酶活性。若消化后的貼壁細胞需要繼續(xù)培養(yǎng)，建議消化后用含Ca2+/Mg 2+的PBS清洗，因為Ca2+/Mg2+有助于細胞的貼壁過程。另外，若需要在緩沖液中長時間保存細胞，也推薦使用含Ca2+/Mg2+的PBS。

? 康寧無Ca2+/Mg2+離子的PBS和DPBS的區(qū)別是什么？
取決于您的研究應(yīng)用。除了一些Ca2+/Mg2+會影響實驗結(jié)果的實驗以外，一般在胰酶消化前，建議用無Ca2+/Mg2+離子的PBS清洗細胞，因為Ca2+/Mg2+會抑制胰酶活性。若消化后的貼壁細胞需要繼續(xù)培養(yǎng)，建議消化后用含Ca2+/Mg2+的PBS清洗，因為Ca2+/Mg2+有助于細胞的貼壁過程。另外，若需要在緩沖液中長時間保存細胞，也推薦使用含Ca2+/Mg2+的PBS。

? 康寧是否有注射級別（WFI）的水？
康寧細胞培養(yǎng)用水按照USP和/或EP 中對注射用水（WFI）的無菌要求進行質(zhì)控，但康寧的該類產(chǎn)品為科研用產(chǎn)品，非臨床注射用水。

? 用于消化的胰酶中加EDTA的原因是什么？
鈣離子會抑制胰酶活性，EDTA作為鈣離子螯合劑，可以去除鈣離子，有助于胰酶更好發(fā)揮消化細胞的功能

? 為什么在使用胰酶前要先清洗貼壁細胞？
目前大部分情況下，細胞培養(yǎng)液中都含有一定量血清。血清中含有抑制胰酶活性的成分，如α1-antitrypsin 和α2-macroglobulin。建議使用無鈣鎂離子的緩沖液清洗細胞。